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  • 產品詳情
    • 產品名稱:質粒pEGFP-N1

    • 產品型號:FS-01P98581
    • 產品廠商:撫生
    • 產品文檔:
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    簡單介紹:
    質粒pEGFP-N1運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區域操作。
    詳情介紹:

    操作流程:

    1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

    2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;

    3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

    4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

    5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

    6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

    7.每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

    產品特點:

    1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體,柱式法純化,操作簡單快捷。

    2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

    3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3~5μg mtDNA。

    注意:本產品只適合于動物材料,不適合于植物材料,因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

    產品名稱

    質粒pEGFP-N1

    規格

    2μg

    貨號

    FS-01P98581

    產品組成:

    成分

    規格

    溶液A

    13ml

    溶液B

    13ml

    溶液C

    18ml

    離心吸附柱

    50套

    通用洗柱液

    50ml

    DNA洗脫液

    10ml

    說明書

    1份


    使用方法:

    :培養細胞預處理

    1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養細胞,離心收集后棄上清。

    2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

    :組織細胞預處理

    3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

    :血液預處理

    4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

    5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

    柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

    5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續下步操作。

    6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

    7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

    8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

    9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正?,F象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

    10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

    11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

    12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

    注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發。

    13. 重復上步1次。

    14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

    15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

    16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

    17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

    18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

    19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品:
    組織內蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒20次雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒,

    血液蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒20次駱駝內皮素1(ET-1)ELISA試劑盒,

    體液蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒20次山羊促生長釋放(GHRH)ELISA試劑盒,

    純化線粒體蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒20次鹿胰島素樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒,

    植物蛋白氧化(羰基化;carbonyl)熒光檢測試劑盒20次兔子纖溶酶原(Plg)ELISA試劑盒,

    蛋白硝基化染色測定試劑盒10次兔血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒,

    蛋白巰基化(S-thiolation)高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒20次兔子神經生長因子(NGF)ELISA試劑盒,

    蛋白巰基化(S-thiolation)同位素法分析試劑盒20次兔子白三烯B4(LTB4)ELISA試劑盒,

    精氨酸(ARG)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒20次植物鈣調素(CAM)ELISA試劑盒,

    組氨酸(HIS)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒腫瘤標志物(CA724)ELISA試劑盒--動物,人

    亮氨酸(LEUCINE)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒去氧膽酸鹽瓊脂

    蛋氨酸(MET)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒標準I號營養瓊脂

    苯丙氨酸(PHE)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒A PT 瓊脂用于乳酸菌分離培養

    脯氨酸(PRO)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒L-谷氨酸二乙酯鹽酸鹽

    酪氨酸(TYR)氧化高效液相色譜 (HPLC)分析試劑盒人萊姆IgG(Lyme-IgG)ELISA試劑盒,Lyme-IgG ELISA
    質粒pEGFP-N1CCR-2B  表面趨化因子受體2B抗體藍VF Indicator

    CCR-3  表面趨化因子受體3抗體乙酸苯酯 99%

    CCR-4/CD194  表面趨化因子受體4抗體撲草凈 分析標準品,99%

    CCR5  表面趨化因子受體5抗體撲草凈標準溶液 10μg/ml,u=6%

    CCR6/CD196  表面趨化因子受體6抗體撲草凈標準溶液 100μg/ml,u=4%

    CXCR6  表面趨化因子受體6抗體撲草凈 分析標準品,99.5%

    CCR7/CD197  表面趨化因子受體7抗體聚乙二二烯酸酯 平均分子量 ~258

    CXCL10/Gamma-IP-10  CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗體聚乙二二烯酸酯 平均分子量~575

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